Приготування поживних середовищ для культивування клітин і тканин in vitro

Відео: Етапи культивування микрорганизмов

Компоненти середовища для вирощування рослинних клітин і тканин можна розділити на 6 основних груп, що зазвичай відображає порядок приготування концентрованих маткових розчинів: макроелементи, мікроелементи, джерела заліза, вітаміни, джерела вуглецю, фітогормони.

Основою для всіх поживних середовищ для культивування рослинних експлантів є суміш мінеральних солей. Це сполуки азоту у вигляді нітратів, нітритів, солей аммонія- фосфору - у вигляді фосфатов- сірки - у вигляді сульфатов- а також розчинних солей К +, Na +, Са2 +, Мg2 +. Залізо використовується у вигляді хелатів [FeО4 або Fe2O4 + ЕДТА (етилендіамінтетраоцтової кислоти) або її натрієва сіль Na ЕДТА (трилон Б)] - найбільш доступній формі для засвоєння рослинними тканинами.

Азот, фосфор, сірка входять до складу органічних сполук: білків, жирів, нуклеїнових кислот. Залізо, цинк, марганець, молібден, кобальт в поєднанні з порфиринами утворюють макромолекули пігментів фотосинтезу (хлорофілу), окислювально-відновних ферментів (каталази, пероксидази, поліфенолоксидази). Отже, всі ці сполуки виконують в клітинах і тканинах структурну функцію. У той же час іони К +, Na +, Са2 +, Cl -, Н + необхідні для регуляції pH середовища і підтримки фізіологічних градієнтів клітин (тургору, осмотичного тиску, полярності).

Відео: Приготування поживного середовища для фаленопсис в лабораторії

Як джерело вуглецю для біологічних макромолекул, а також при культивуванні гетеротрофних тканин (каллусов і суспензій) в поживні середовища додають вуглеводи в концентрації 20-60 г / л. Зазвичай це дисахариди (сахароза), моносахариди (гексози: глюкоза і фруктоза, пентози: ксилоза та інші). Полісахариди в поживних середовищах практично не використовуються. Тільки деякі типи тканин (пухлинні), що містять гідролітичні ферменти, вирощують на середовищах з крохмалем, раффинозу (природний трисахарид), целлобіоза.

Для стимуляції біохімічних реакцій в клітці використовують біологічні каталізатори - вітаміни групи В: В1, В6, В12 С (аскорбінову кислоту), РР (нікотинову кислоту), мезоінозіт (витаминоподобное з`єднання).

Тіамін (В1) входить до складу піруватдекарбоксилази, бере участь в перетвореннях вуглеводів. Тіамінпірофосфат входить до складу ферментів окисного декарбоксилювання кетокислот (піровиноградної і кетоглутаровой), є коферментом транскетолази (фермент пентозомонофосфатного шляху).

Піридоксин (В6) у вигляді фосфорнокислого ефіру входить до складу ферментів декарбоксилирования і переамінування амінокислот.

Відео: Живильні середовища для мікробіології. Частина 1. Основні відомості

Нікотинова кислота (РР) у вигляді аміду входить до складу дегідрогеназ НАД і НАДФ, які каталізують донорно-акцепторні електротранспорт ланцюг Н + (відібрання Н + від молекул органічних речовин).

Для управління процесами формоутворення в культурі тканин необхідні біологічні регулятори росту і розвитку - фітогормони. Ці речовини впливають на диференціацію і дедиференціації клітин і тканин, ініціюють гистогенез, індукують поділ і розтягнення клітин, беруть участь в процесах старіння і дозрівання, або стимулюють, або пригнічують ріст і розвиток клітинних культур, обумовлюють формування статі. У біотехнологічних дослідженнях частіше використовують гормони, що стимулюють ріст і розвиток: ауксини, цитокініни, гібереліни.

Відео: Мікробіологія. Приготування фіксованих препаратів (Е. Звонарьова)

Ауксини: ІУК - b-індол-3-оцтова кислота, ІМК - индолил-3-мас-ляная кислота, НУК - a-нафтілуксусная кислота, 2,4-Д - 2,4-діхлорфеноксіуксусная кислота.

Цитокініни: кинетин - 6-фурфуріламінопурін, зеатин, NN-дифеніл-сечовина, 6-БАП - 6-бензіламінопурін.

Поділися в соц мережах:

Увага, тільки СЬОГОДНІ!

Схожі